这篇文章给大家聊聊关于转膜时间过长，以及转膜时间太长会把蛋白转丢吗对应的知识点，希望对各位有所帮助，不要忘了收藏本站哦。
本文目录
- 大分子转膜多久
- wb电转时间过久有影响吗
- 蛋白PAGE电泳后,不能及时转膜,能否把胶保存一段时间再转呢
- WB转膜正负极接反了转了30min
- western 湿转 时间长了会怎样
- wB转膜转反了还能转回来不
- 是不是分子量越大转膜时间越长
一、大分子转膜多久
大分子转膜的时间取决于多种因素，包括膜材料、膜尺寸、操作条件等。一般来说，大分子如蛋白质或DNA转膜所需时间较长。以下是一些常见 *** 和参考数据：
1.电泳转膜：在电泳转膜中，大分子通过膜孔的电动力驱动转移到膜的另一侧。转膜时间取决于电场强度、膜孔大小和溶液条件等。通常转膜时间介于几分钟到数小时之间。
2.扩散转膜：扩散转膜是通过溶质在浓度差的驱动下从一个区域扩散到另一个区域的过程。对于大分子，扩散速率较低，因此转膜时间可能需要几小时甚至几天。
需要注意的是，转膜时间还可能受到实验要求的限制。在某些情况下，可能需要减小转膜时间，可以采取一些加速 *** ，如增加转膜的驱动力、调整温度等。
总之，大分子转膜的时间是一个相对复杂的问题，具体的转膜时间需要根据具体应用和实验条件来确定。
二、wb电转时间过久有影响吗
wb电转时间过久有影响，会时间过久会导致小分子蛋白很容易转过头，不在膜上，而转到滤纸上了。
电转印膜的选择：有 NC膜、重氮化膜和阳离子尼龙膜， PVDF膜。其中 NC膜使用的最为普遍，它的蛋白质容量大，可用各种染色 *** 进行检测，但是它与蛋白质的结合是非价性的，膜干燥后很脆。
外膜的孔径大小也是考虑的重要因素，目的蛋白30KD以下用0.22 um孔径的 NC膜，30KD以上用0.45 um孔径的 NC膜。
三、蛋白PAGE电泳后,不能及时转膜,能否把胶保存一段时间再转呢
转膜不及时造成扩散。蛋白在凝胶中是会弥散的，通常都是完成电泳后就尽快转膜，否则弥散后有些实验结果就无法判断了。
1、转膜缓冲液：甘氨酸2.9g；Tris 5.8g；SDS 0.37g；甲醇200ml；加双蒸水定容至1000ml。
2、转膜装置从下至上依次按阳极碳板、24层滤纸、NC膜、凝胶、24层滤纸、阴极碳板的顺序放好，滤纸、凝胶、NC膜精确对齐，每一步去除气泡，上压重物，将碳板上多余的液体吸干。接通电源，恒流，转移1.5h。
3、转移结束后，断开电源将膜取出，割取待测膜条做免疫印迹。将有蛋白标准的条带染色，放入膜染色液中50s后，在50%甲醇中脱色至背景清晰，然后用双蒸水洗，风干夹于两层滤纸中保存，留与显色结果作对比。
1、用于分离和纯化双链DNA片段的非变性聚丙烯酰胺凝胶。在未变凝胶中分离DNA的缺点是DNA的迁移率受碱基组成和序列的影响。由于无法得知未知DNA的迁移是否反常，不能用未变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳确定双链DNA的大小。
2、用于分离及纯化单链DNA片段的变性聚丙烯酰胺凝胶。
参考资料来源：百度百科-凝胶电泳
参考资料来源：百度百科-免疫印迹法
参考资料来源：百度百科-Western免疫印迹
四、WB转膜正负极接反了转了30min
1、可以看出在实验过程中会出现很多人为操作上的失误，比如封闭时间、清洗时间、抗体孵育时间的控制，抗体孵育的温度条件，保持膜的湿润等。为了避免这些人为操作所导致实验失败的因素，可以通过使用我司研发的一款AW系列全自动清洗工作站，从封闭到显色之前都可以在这台设备中完成，即可以控制时间和温度，也大大节约了人为参与的时间，降低人为误差，提高实验成功率。
2、实验步骤大致分为：蛋白提取、蛋白定量、SDS-PAGE电泳、转膜、封闭、一抗孵育、清洗、二抗孵育、清洗、蛋白检测。步骤复杂，耗时长，容易出现各种问题，尤其对于新手来说更是一个挑战。
五、western 湿转 时间长了会怎样
1、western湿转时间长了造成的影响，要具体结合目标蛋白分子量等来分析
2、一般如果目标蛋白分子量很小，而膜的孔径较大。转膜缓冲液条件使得蛋白移动快或者缺乏帮助蛋白与膜结合的性质，则有可能过度转膜，即蛋白穿过膜而丢失
3、如果目标蛋白分子量非常大，而缓冲液条件不促进它的移动，即使湿转时间很长也有可能未将目的蛋白完全转到膜上
4、所以western湿转时间长了会怎样，要具体分析，不能一概而论
六、wB转膜转反了还能转回来不
个人建议时间不要再长了，再长蛋白有可能变性造成后续实验无法进行。我原来遇到这类问题是用以下几种 *** 尝试解决的，你也可以尝试一下（1）检查一下你的三明治结构夹的怎么样，尤其是膜及滤纸的边缘是不是有短接的地方，这个是最容易出现的问题。另外膜和胶之间是不是有气泡，不推荐用外力去擀压膜和胶，推荐用缓冲液润湿膜和胶之后，像做切片盖盖玻片一样从一边盖下赶出气体。要绝对确保没有短接和气泡，不然很容易出现转膜不完全的问题。（2）换成恒压的试试，这个方案我不知道原理是什么，但是有的时候确实能够解决问题。（3）换成半干转的 *** ，但是注意半干转更要确保没有短接气泡，而且时间不能过长，半干转的发热量很大。我不清楚你的蛋白是不是需要活性，如果遇热失活那就不能用这种 *** 。（4）这个 *** 比较浪费，看老板让不让你用了。换成品缓冲液商品，西格玛的比较好。另外换24层滤纸成品，用一次不要再使用第二次。还有就是还一个牌子的膜，我们实验室曾经遇到过一个牌子的膜完全转不出来的现象。以上，希望你的问题早日能够解决。
七、是不是分子量越大转膜时间越长
目的蛋白的分子量越大，需要的转膜时间越长，目的蛋白的分子量越小，需要的转膜时间越短。转膜分干转和湿转，恒流转膜一般0.8mA/cm2
分离胶浓度（％）线性分离范围电泳时间(h)
对于湿转法：一般转膜的电流在200mA-400 mA之间，转膜时间为30-60分钟。也可以在15-20 mA电流中转膜过夜。大片段的>50 KD的可以选用350 mA电流，小片段的可以用250 mA。具体的转膜时间要根据目的蛋白的大小而定，目的蛋白的分子量越大，需要的转膜时间越长，目的蛋白的分子量越小，需要的转膜时间越短。
关于转膜时间过长，转膜时间太长会把蛋白转丢吗的介绍到此结束，希望对大家有所帮助。
